Elisa試劑盒的配制方法及選購提醒
目前，Elisa試劑盒在實(shí)驗(yàn)室中已經(jīng)相當(dāng)?shù)钠占傲耍^大多數(shù)的試劑盒都是用于檢測未知樣本中抗原的濃度。而市場中試劑盒并非隨便使用的，需要根據(jù)操作者們的自身?xiàng)l件與要求。我們在選擇Elisa試劑盒應(yīng)該重點(diǎn)考慮實(shí)驗(yàn)類型
雖然Elisa試劑盒有多種類型，但是它們都有一個共同特點(diǎn)，就是進(jìn)行抗原捕獲。一般捕獲形式包括將抗原吸附到微孔板或者用微孔板上的抗體進(jìn)行捕獲。In-cellELISA和酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)ELISPOT是兩種特殊的類型，In-cellELISA需要將微孔板中培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行固定和通透化，然后再用抗體原位檢測。ELISPOT有點(diǎn)像蛋白印跡Westernblot，先在帶膜的微孔板中培養(yǎng)細(xì)胞，然后在膜上檢測細(xì)胞分泌的抗原形成斑點(diǎn)。此外，我們還需要根據(jù)自身需要選擇96孔板或是384孔板進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)。
通常人們使用雙抗夾心法進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)，雙抗夾心法中抗原被夾在捕獲抗體和檢測抗體之間，這種方法既靈敏又有效，受到了許多研究者的青睞。不過有時候雙抗夾心法并不是好的選擇，例如有時候抗原特別小讓兩個大抗體難以附著，又或者抗體只有一個抗體結(jié)合位點(diǎn)。在上述情況下，競爭性ELISA就更為適用，這種方法是采用帶標(biāo)記的純化抗原與樣本中無標(biāo)記的抗原進(jìn)行競爭，以結(jié)合捕獲抗體。
單克隆抗體和多克隆抗體都能夠用于ELISA，實(shí)際上有時候二者結(jié)合效果更好。雙抗夾心法ELISA中捕獲抗體與檢測抗體（不論多抗還是單抗）的配對很有講究。我們不希望捕獲抗體與檢測抗體競爭抗原上的同一位點(diǎn)，為此我們就需要確保捕獲抗體和檢測抗體所識別的抗原表位不存在重疊。如果捕獲抗體和檢測抗體之間發(fā)生了沖突，就會對實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生較大影響。要避免這一問題，我們可以選擇購買“matchedpair”的捕獲/檢測抗體對，這些打包在一起的抗體是商家經(jīng)過驗(yàn)證才的好組合。
根據(jù)試劑盒的性能選擇，首先了解Elisa試劑盒范圍
Elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)中為了確定信號和背景應(yīng)將捕獲抗體（0.5-4μg/ml）和檢測抗體（0.25-2μg/ml）在預(yù)實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行彼此相抗的滴定。同時，應(yīng)包括在適當(dāng)范圍內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋。按試劑說明書常規(guī)提供的范圍進(jìn)行操作。
Elisa試劑盒的配制方法：對于每種細(xì)胞因子應(yīng)仔細(xì)閱讀說明書，注意每批的細(xì)節(jié)。在使用細(xì)胞因子前，瞬時離心試劑瓶，盡可能多地收回其中的細(xì)胞因子。根據(jù)每批說明書中的細(xì)節(jié)，將凍干的細(xì)胞因子復(fù)溶。
第二、多咨詢供應(yīng)商的技術(shù)員，具體了解產(chǎn)品后再考慮購買
一般待測抗原標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍的可通過將標(biāo)準(zhǔn)品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml到15pg/ml。可利用標(biāo)準(zhǔn)的ELISA操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內(nèi)提高靈敏度。為了優(yōu)化靈敏度，建議孵育標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本。若使用過氧化物酶作為顯色系統(tǒng)，應(yīng)嚴(yán)禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉，疊氮鈉可抑制過氧化物ELISA試劑盒酶的活性。
第三、Elisa試劑盒選購注意事項(xiàng)
1.選擇時間久的試劑盒供應(yīng)商，以免遇見騙子公司。
2.濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶后，請于37℃孵育15分鐘
3.選擇并購買后在效期內(nèi)使用，不同批號的試劑不能混用。
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